一體式超聲波破碎儀對大腸桿菌實驗的幫助

　　破碎大腸桿菌用于提取表達外源蛋白，在使用一體式超聲波破碎儀之前，用PBS懸浮，然后再破碎效果較好，其作用還是很明顯的，對其他的一些細菌同樣起作用，比如鏈霉菌。

　　細菌沉淀直接加樣品1 buffer，再加5μl的巰基乙醇，混勻，離心，煮沸10min，直接上樣，染色脫色步驟：

　　將膠放入適量的染色液微波爐里加熱1min(下次適當補點醋酸即可),將染色液換成大量的水(自來水即可)在微波爐煮10min就可以。在表達重組蛋白后用超聲波破碎細胞，采用冰浴，400w，破2s停1s，但是不一會就產生大量泡沫，影響了破碎功率，pbs和tris緩沖液都是這樣，最后都是破碎不*，而蛋白就在這些未破碎的細胞中。

　　相關問題探討：

　　1.試驗中產生氣泡：因為探頭位置沒放好。超聲波破碎儀探頭一定要接近底部約1cm。功率根據儀器不同會有所不同，但可通過觀察液面，有波動但不要太劇烈就好。

　　2.破3s停10s，破碎20-30個循環觀察效果。

　　3.探頭位置擺放要注意，聽聲音如果不對的話就要及時調整。另外可從菌濃度方面考慮。在使用超聲波破碎時試著加大體積,振幅最好不要超過60%。

　　4.嘗試超8s停8s,對有些菌體蛋白來說，通常方法很難散熱，導致蛋白變性產生氣泡，可停頓時間稍長一些，這種情況多見于包涵體形式的蛋白。如果換用一體式超聲波破碎儀來進行工作，由于熱耗較小，停頓周期可適當減小。